Anti-His6-Peroxidase from mouse IgG1

11965085001 ROCHE

[ELISA][WB]

將蛋白質的N端或C端，帶上多個(通常至少六個)連續組胺酸 (Histidines；簡稱His6)的胺基酸序列，以構成重組蛋白。當要純化這樣帶有多個連續組胺酸的重組蛋白時，能使用填充二價金屬離子鎳或鈷的純化管柱。利用改變pH值，讓蛋白質電性改變，pH值↑，有助於管柱上的二價金屬離子與蛋白質的親和力；反之當pH值↓時，二價金屬離子與環境中的H⁺競爭，蛋白質與管柱的親和力就會受影響而下降。這樣的純化方式，相較於抗體純化或是GST純化法，先決條件就是要確認蛋白質摺疊結構是否能自然變化，才能確保純化效果。在完成純化之後，若不需要蛋白質上之多個連續組胺酸(His)，也能使用一些酵素作移除的動作，如移除N-terminal His6-tags的TAGZyme。在進行純化重組蛋白前，建議使用具辨識His6胺基酸序列能力的抗體，搭配SDS-PAGE等蛋白質定性技術以確認是否重組成功，再進行後續實驗。

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Citation: Increasing the antitumor effect of an EpCAM-targeting fusion toxin by facile click PEGylation. Mol Cancer Ther. 2014 Feb;13(2):375-85.