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5個心法,讓你細胞 「凍的輕鬆,養的容易」!
專題報導
5個心法,讓你細胞 「凍的輕鬆,養的容易」!
癌症
2017-06-06

5個心法,讓你細胞 「凍的輕鬆,養的容易」!

「細胞培養」是生物研究領域,最常見的實驗技術之一,但常見確不代表容易。細胞培養技術,從挑選合適的細胞株、細胞的培養繼代,到細胞的冷凍保存,都充斥著滿滿的挑戰,而細胞的冷凍保存過程,尤其關鍵,因為它不僅是細胞旅程的終點也是起點。

如果細胞沒有被妥善冷凍,解凍後細胞存活率,也會大受影響喔。你有遇過細胞解凍後,細胞卻養不活的困擾嗎?想知道該怎樣冷凍細胞,才能提升解凍後,細胞的存活率嗎?我們整理了5個關鍵心法,幫助您細胞凍的輕鬆,養的容易。

 

細胞冷凍,關鍵在於緩慢降溫

關於細胞的冷凍條件,經由許多實驗證實,必須要以每分鐘下降1~3 ˚C的速率,緩慢地將細胞,由室溫下降到 -80˚C,這樣才能避免大冰晶在細胞內形成,減少細胞傷害。之後,當細胞要長期保存時,必須存放到液態氮桶內,目的是將環境溫度維持在低於-135˚C,當細胞環境處於這個狀態時,水分子將會進入玻璃狀態(glass transition),也因此,所有細胞內的分子活動,以及生物活性才能完全停止,進入休眠狀態。

選擇合適的抗凍劑,才能全面保護細胞免受傷害

細胞在冷凍過程中,一定要使用抗凍劑,抗凍劑的目的,是為了讓細胞內的水分子,在冷凍過程中,能夠緩慢釋放到細胞外,以免細胞內的水分,在冷凍的過程中形成冰晶,而使得細胞結構被破壞。實驗室最常用的抗凍劑多為DMSO或是甘油,至於如何選擇適合自己細胞的抗凍劑,建議參考細胞株的原廠說明書。唯一要提醒的是,抗凍劑如DMSO,一定要選擇適用於生物等級的,才能確保細胞保存品質。

冷凍細胞前,最好做個健康檢查

細胞在冷凍之前,應該要確認細胞的活性是否有達90%以上,而若細胞能在生長”對數時期”進行冷凍,解凍後的存活率通常也會較高。另外,在冷凍細胞之前,也應該要檢查細胞,是否有黴漿菌等微生物的存在,以免花了時間保存細胞,到頭來,卻無法養活或使用。

 

冷凍幹細胞、Hybridoma或組織工程用細胞,應使用特殊等級抗凍配方

依據ECACC (歐洲細胞庫)指南,一般建議冷凍細胞時,應使用90%血清與10%DMSO抗凍劑,作為細胞的冷凍保存液配方;但在某些特殊狀況下,如幹細胞,因為DMSO或胎牛血清的生長因子,可能會誘發細胞分化,因此不建議使用該配方做為保存液,而應改用其它無添加血清,或是特殊等級的抗凍劑配方。

解凍細胞有訣竅 - 快速回溫傷害少

細胞在冷凍過程中,一定要使用抗凍劑,抗凍劑的目的,是為了讓細胞內的水分子,在冷凍過程中,能夠緩慢釋放到細胞外,以免細胞內的水分,在冷凍的過程中形成冰晶,而使得細胞結構被破壞。實驗室最常用的抗凍劑多為DMSO或是甘油,至於如何選擇適合自己細胞的抗凍劑,建議參考細胞株的原廠說明書。唯一要提醒的是,抗凍劑如DMSO,一定要選擇適用於生物等級的,才能確保細胞保存品質。

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